Responsable: Dr. Roberto Sánchez Olea
Lineas de Investigación
a) Determinar la función de las GTPasas Gpn1 y Gpn3 en células de mamífero en cultivo a través de analizar las consecuencias de suprimir su expresión con técnicas de RNA de interferencia (Sanchez-Olea et al., 2008; JBC 283:24400)
b) Identificar los mecanismos moleculares regulados por Gpn3 que expliquen nuestros hallazgos originales de que Gpn3 es esencial para la acumulación nuclear de la RNA polimerasa II (Calera et al., 2011; BBA 1813:1708).
c) Explorar diferencias en la importancia de Gpn3 en la acumulación nuclear de la RNA polimerasa II entre células tumorogénicas y no tumorogénicas de mama (Calera et al., 2011; BBA 1813:1708), y su empleo en el diagnóstico del cáncer.
d) Investigar la localización y tráfico intracelular de las proteínas Gpn1 y Gpn3 utilizando versiones híbridas con proteínas fluorescentes. Utilizamos DNA recombinante para generar mutantes puntuales y otras variantes moleculares de Gpn1 y Gpn3, y analizamos el efecto de estos cambios en su localización y tráfico intracelular con microscopía de fluorescencia
e) Análisis de las modificaciones postraduccionales de la proteína Gpn1 durante el ciclo celular y en respuesta a la exposición a la luz ultravioleta
f) Caracterizar la interacción física entre las proteínas Gpn1 y Gpn3 tanto en células de mamífero en cultivo, como con proteínas Gpn1 y Gpn3 recombinantes producidas en bacterias. Empleamos ensayos de inmunoprecipitación y western blot, así como la técnica de FRET
g) Determinar la estructura tridimensional de las proteínas Gpn1 y Gpn3 recombinantes producidas en bacterias por cristalografía de rayos X. Aplicamos técnicas de DNA recombinante para generar las construcciones moleculares que nos premitan purificar HisGpn1 y HisGpn3 producidas en bacterias en cantidad y pureza suficiente para su cristalización.
Publicaciones
Reyes-Pardo, H., Barbosa-Camacho, A.A., Pérez-Mejía, A., Lara-Chacón, B., Salas-Estrada, L., Robledo-Rivera, A.Y., Montero-Moran, G., Lara-Gómez, S. Calera-Medina, M., Sánchez-Olea, R. (2012) A nuclear export sequence in GPN-loop GTPase 1, an essential protein for nuclear tageting of RNA polymerase II, is necessary and sufficient for nuclear export. Biochimica et Biophysica Acta –Molecular Cell Research. 1823: 1756-1766.
Calera, M.R., Zamora-Ramos, C., Araiza-Villanueva, M.G., Moreno-Aguilar, C.A., Peña-Gómez, S.G., Castellanos-Terán, F., Robledo-Rivera, A.Y., y Sánchez-Olea, R. (2011) Parcs/Gpn3 is required for the nuclear accumulation of RNA polymerase II. Biochimica et Biophysica Acta (Molecular Cell Research) 1813(10):1708-1716
Calera, M.R., Wang, Z., Sánchez-Olea, R., Paul, D.L., Civan, M.M., y Goodenough, D.A. (2009) Depression of intraocular pressure following inactivation of connexin43 in the nonpigmented epithelium of the ciliary body. Invest Ophthalmol Vis Sci. 50(5):2185-2193
Sánchez-Olea, R., Calera, M.R., Degterev, A. (2009) Molecular pathways involved in cell death after chemically induced DNA damage. Molecular, Clinical and Environmental Toxicology 1: 209-229.
Franco, R., Sánchez-Olea, R., Reyes-Reyes, E.M., Panayiotidis, M.I. (2009) Environmental toxicity, oxidative stress and apoptosis: Ménage a trios. Mutation Resarch/Genetics Toxicology and Environmental Mutagenesis 674: 3-22.
